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DNA电泳

DNA电泳常见问题分析及解决方案

DNA条带模糊：1，DNA降解避免核酸酶污染；转印电泳AG与LG反应的特点：特异性、比例性、可逆性1，特异性：由抗原决定簇和LG分子的超变区之间空间结构的互补性确定的。2，电泳缓冲液陈旧电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液；3，所用电泳条件不合适电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃；巨大DNA链电泳，温度应＜15℃；核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力；4， DNA上样量过多减少凝胶中DNA上样量；5，DNA样含盐过高电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐；6，有蛋白污染电泳前酚抽提去除蛋白；7，DNA变性电泳前勿加热，用20mM NaCl缓冲液稀释DNA

不规则DNA条带迁移：1， 对于λ/Hind III片段cos位点复性电泳前于65℃加热DNA 5分钟，然后在冰上冷却5分钟；目前核酸电泳技术主流方法分为以下三种：琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、脉冲场凝胶电泳技术（PFGE）。2，电泳条件不合适电泳电压不超过20V/cm；温度＜30℃；经常更换电泳缓冲液；3，DNA变性以20mM NaCl Buffer稀释DNA，电泳前勿加热 

  带弱或无DNA条带：1，DNA的上样量不够增加DNA的上样量；有时由于清洗不到位，边条压片表面会有污物凸起，也会导致两侧不能密闭夹紧而漏胶。聚酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度稍高，上样量可适当降低；2， DNA降解避免DNA的核酸酶污染；3，DNA走出凝胶缩短电泳时间，降低电压，增强凝胶浓度；4，对于EB染色的DNA，所用光源不合适应用短波长（254nm）的紫外光源

DNA带缺失：1，小DNA带走出凝胶缩短电泳时间，降低电压，增强凝胶浓度；电泳槽是凝胶电泳系统的***部分，生命科学电泳实验技术的迅猛发展主要也是体现在电泳槽上。2，分子大小相近的DNA带不易分辨增加电泳时间，核准正确的凝胶浓度；3， DNA 变性电泳前请勿高温加热DNA链，以20mM NaCl Buffer稀释DNA；4，DNA链巨大，常规凝胶电泳不合适 在脉冲凝胶电泳上分析

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蛋白凝胶电泳的分类

蛋白凝胶电泳分为非变性凝胶和变性凝胶

所谓非变性凝胶，即在凝胶中不加SDS和尿素等变性剂，这种凝胶中，蛋白质仍保持活性，其迁移率受它的静电荷与分子大小两个因素的影响。因此在非变性凝胶中进行电泳是不能测得分子量的，常用于酶的鉴定、同工酶分析和提纯。

所谓变性凝胶，即在凝胶中加入变性剂，如尿素、SDS(十二烷基磺酸钠)、DTT等。这些变性剂可以破坏或改变蛋白质的结构，把绝大部分蛋白质分离成组成它们的亚基。LF一Mini2型小型垂直电泳槽产品特点龙方科技——***电泳槽供应商，我们为您带来以下信息。同时在蛋白质分子周围包围了大量负电荷。这种电荷基本上掩盖了无变性剂存在时正常就有的任何电荷。蛋白质在这种变性凝胶中的迁移率与它们分子量的对数成直线关系。因此利用变性凝胶进行电泳可以测得蛋白质的分子量。目前应用较多的变性剂为SDS。

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核酸电泳凝胶的摄影与净化处理

核酸电泳凝胶的摄影与净化处理

1.凝胶摄影

需配置分辨率较高的照相机，照相机固定架，近摄镜和红色滤光镜以及有机玻璃防护面罩。

操作需在暗室进行，将相机固定好，把凝胶放在紫外检测仪上适当位置，调焦，装上红色滤光片，按常规拍照。

亦可使用凝胶自动处理系统，但仪器费用较高。

2.EB溶液的净化处理

由于EB具有一定的毒性，实验结束后，应对含EB的溶液进行净化处理再行弃置，以避免污染环境和危害人体健康。

(1) 对于EB含量大于0.5μg/ml的溶液，可如下处理:

①将EB溶液用水稀释至浓度低于0.5μg/ml;

②加入一倍体积的0.5mol/L KMnO4 ，混匀，再加入等量的25mol/L HCl，混匀，置室温数小时;

③加入一倍体积的2.5mol/L NaOH，混匀并废弃。

(2) EB含量小于0.5μg/ml的溶液可如下处理:

① 按1mg/ml的量加入活性炭，不时轻摇混匀，室温放置1小时;

② 用滤纸过滤并将活性碳与滤纸密封后丢弃。

LF-31DN型 水平琼脂糖电泳槽 

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产品特点：

聚碳酸酯注塑成型，操作方便，可以制作四种不同规格的琼脂糖凝胶；

凝胶托盘带有加样背景黑带和荧光标尺，便于加样和观察；

透明上盖开孔式设计，便于散热；

高柔韧性导线，开盖断电，确保安全；

下槽桥式设计，节省缓冲液；

上盖具有限位功能，保证操作准确。

技术参数：

电极铂金丝纯度为99.95%，电场强大、稳定；                        

凝胶板规格(L×W)：60×60mm；120×60mm(宽胶)；

60×120mm(长胶)；120×120mm;

样品梳：11+25齿(1.0mm厚)；6+13齿,8+18齿(1.5mm厚)；

2+3齿(2.0mm厚) ;

缓冲液总容量：约650ml

产品用途：适用于分离、制备DNA、RNA。