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发布时间:2021-11-06 19:36:00 作者:龙方科技
DNA电泳
DNA电泳常见问题分析及解决方案
DNA条带模糊:1,DNA降解避免核酸酶污染;2,电泳缓冲液陈旧电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低,pH值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液;3,所用电泳条件不合适电泳时电压不应超过20V/cm,温度<30℃;巨大DNA链电泳,温度应<15℃;核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力;4, DNA上样量过多减少凝胶中DNA上样量;5,DNA样含盐过高电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐;6,有蛋白污染电泳前酚抽提去除蛋白;7,DNA变性电泳前勿加热,用20mM NaCl缓冲液稀释DNA
不规则DNA条带迁移:1, 对于λ/Hind III片段cos位点复性电泳前于65℃加热DNA 5分钟,然后在冰上冷却5分钟;2,电泳条件不合适电泳电压不超过20V/cm;温度<30℃;经常更换电泳缓冲液;3,DNA变性以20mM NaCl Buffer稀释DNA,电泳前勿加热
带弱或无DNA条带:1,DNA的上样量不够增加DNA的上样量;聚酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度稍高,上样量可适当降低;2, DNA降解避免DNA的核酸酶污染;3,DNA走出凝胶缩短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度;4,对于EB染色的DNA,所用光源不合适应用短波长(254nm)的紫外光源
DNA带缺失:1,小DNA带走出凝胶缩短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度;2,分子大小相近的DNA带不易分辨增加电泳时间,核准正确的凝胶浓度;3, DNA 变性电泳前请勿高温加热DNA链,以20mM NaCl Buffer稀释DNA;4,DNA链巨大,常规凝胶电泳不合适 在脉冲凝胶电泳上分析
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核酸电泳凝胶的染色
核酸电泳凝胶的染色
凝胶的染色和观察 凝胶中核酸带的染色,常用***化乙锭法和银染法。前者与琼脂糖凝胶的染色方法相同。
银染法的灵敏度较高,可如下操作:
(1) 将凝胶置固定液(10%乙醇,0.5%冰醋酸)中固定10分钟;
(2) 双蒸水洗1-2次;
(3) 置0.01mol/L AgNO3溶液中,室温反应15-30分钟;
(4) 充分水洗;
(5) 置NaOH-甲醛混合液(200ml 3%NaOH,含1ml甲醛)中反应至条带显色清晰,本底适宜;
(6) 用5%冰醋酸终止反应。
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LF—CZ05A/B/C型 高通量垂直电泳槽
北京龙方科技为您提供信息如下,希望能对您有所帮助! 龙方电泳 伴您成功!
产品特点:
正负电极的铂金丝直径均为0.26mm,纯度为99.95%,
结实耐用,电场稳定。
双板一次可跑204个电泳样品,大大提升了实验效率。
凝胶玻璃板与边长一体化设计,让操作更简单。
可同时运行2块300×105mm的电泳凝胶。
技术参数:
电泳槽正负电极的铂金丝直径均为0.26mm,
纯度为99.95%。
凝胶面积:300×105mm。
凝胶标准厚度:1mm。
样品梳标准齿数:102齿(可以选配64齿)。
样品梳标准厚度:1mm。
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