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发布时间:2020-07-07 18:51:00 作者:龙方科技
核酸电泳染色液
核酸电泳常用染色液
1、***化乙锭(ethidium bromide, EB)
较为常用的核酸荧光染料,可嵌入核酸双链的配对碱基之间,在紫外线激发下,发出桔红色荧光。 EB-DNA复合物中的EB发出的荧光,比游离的凝胶中的EB发出的荧光强度大10倍,因此无需洗净背景即可清楚观察核酸带型。若EB背景太深,可将凝胶 浸泡于1mmol/LMgSO4中1h或10mmol/L MgCI2中5min,使非结合的EB褪色,这 样可检查到10ng的DNA样品,EB也可用于检测单链DNA或RNA,但其对单链核酸的亲和力相对较小,荧光产率也相对较低。以上内容由北京龙方科技为您提供,想要了解更多电泳槽的相关资讯,欢迎拨打图片上的热线电话。
2、***橙(acridine orange, AO):
***橙可嵌入双链核酸碱基对之间,在254nm紫外线激发下发出530nm的绿色荧光;还通过静电与单链核酸的磷酸基结合,在254nm紫外线激发 下产生640nm的红色荧光。因此可区分单链和双链核酸,灵敏度分别为0.1μg和0.05μg。但***橙的染色操作要求严格,应在 22℃,0.01mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.0)中避光浸泡30min,然后在搪瓷盘中用该缓冲剂4℃脱色过夜或22℃脱色1~2小时。3,DNA变性电泳前请勿高温加热DNA链,以20mMNaClBuffer稀释DNA。
3、亚甲蓝(methylene blue)
可将RNA染成蓝色,但灵敏度不高,而且操作时间长。染色过程:胶浸泡于0.02%的亚甲蓝,10mmol/L Tris-Ac(pH8.3),4℃放置1~2h,用净水洗5~8h(反复换水),带型肉眼可见,较低检测量为 250ng。
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电泳原理
北京龙方科技为您提供信息如下,希望能对您有所帮助! 龙方电泳 伴您成功!
1、(分解)
---在外加直流电场的作用下,水在两极会发生电解反应。在阳极,形成H+极区,便于涂料沉积。
2.电泳(泳动、迁移)
阴离子树脂及OH-在电场作用下,向阳极移动,而阳离子向阴极移动的过程.
3.电沉积(析出)
在阳极被涂工件表面,阴离子树脂与阳极表面酸性离子作用,形成树脂沉积物而析出,沉积于被涂工件表面.
4.电渗(脱水)
工件表面上的涂膜具有多数毛细孔结构,水通过内渗透力从阳极涂膜中排渗出来,在电场作用下,引起涂膜脱水,而涂膜则吸附于工件表面,从而完成整个电泳过程.
5.ED离子交换原理
蛋白电泳槽的凝胶置入与电泳
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a,将控制夹板呈打开方式放置于干净平整桌面上
b,将首块凝胶三明治以薄玻璃板向内方式放置于凝胶支撑架上,凝胶支撑架模铸于组件底部且每侧均有两个,此时凝胶板相对中心有30 度夹角,放置首块胶时须小心确认控制夹板保持平衡状态不会翻倒,在另一侧凝胶支撑架上放置第二块胶,共有两块胶相对中心倾斜(注:凝胶板必须以薄玻璃板向内方式放置于控制夹板两侧,同时,控制夹板需要 2 块胶板组合形成功能组件,如果运行1 或 3 块胶时,须使用单胶堵板代替另一侧的凝胶)。如果是RNA分子,就叫Nouthernblot,如果是蛋白质分子就是WesternBlot。
c,用一只手轻轻将2块胶板推向中心靠紧绿色胶条,确保短玻璃板处在绿色胶条上部的凸起之下并压紧胶板,另一只手将控制夹板合拢在胶板上,使其锁定到位。
d,电泳槽下槽具有两个位置可放置两个电泳槽内芯:带插头电泳槽内芯在后,蘑菇头电泳槽内芯在前,如果只运行 2 块胶则只需用带插头电泳槽内芯,将其放在后部位置上使得红色正极与槽右侧的红色标记相对应,如需做 4 块胶,除放入带插头电泳槽内芯外,还要将蘑菇头电泳槽内芯放入前部位置,确认两者的红色正极与槽右侧的红色标记相对应(注意:位置和方向的错误会使上盖无法盖合)。电泳槽附件主要有:凝胶玻璃板、加样梳、制胶器、凝胶托盘、电泳槽导线等,从用途和样品性质来说,电泳槽主要分为:蛋白电泳槽、蛋白转印电泳槽和核酸电泳槽三大类别。
e,将上盖盖在电泳槽下槽上,确认插头位置正确(上盖上的障碍物可以防止定位错误)。
f,将电泳槽导线的双插头认准正负极插入电泳电源插孔内,恒压 200V 是 SDS-PAGE 和多数 native PAGE 电泳的推荐条件。在 200V 电压条件下运行,SDS-PAGE 大约需要 35 分钟。
g,电泳完成后关断电源,拔出电源插头,移开上盖,小心取出电泳槽内芯,倒出缓冲液。为防止缓冲液漏洒,请在打开控制夹板前倒掉缓冲液。
转印电泳注意事项
一、功能概述
本产品可快速、高质量地转印小型凝胶,它可容纳2个凝胶转印夹,可同时转印两块小型凝胶。
1、一小时内转印2块10×7.5㎝凝胶;也可进行低强度的过夜转印。
2、电极丝相距4㎝可以产生强电场保证有效的蛋白转印。
3、具有颜色标记的转印夹和转印模块能够确保凝胶的正确定向。
二、注意事项
本产品内安装的铂金丝电极易断,使用中应小心操作,铂金丝不在保修范围之内,提醒客户清洗电泳槽时细致观察小心触碰!
附:缓冲液配比(推荐)
5X电泳缓冲液:15.1g Tris+94.0g Gly+5.0g SDS 配成1L
转移缓冲液:3.03g Tris+14.42g Gly+200mL CH3OH 配成1L
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