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发布时间:2020-07-05 22:03:00 作者:龙方科技
蛋白电泳
蛋白电泳的分子筛效应和电荷效应
北京龙方科技***生产、销售电泳槽,以下信息由龙方科技为您提供。
分子筛效应:
大小和形状不同的蛋白质通过一定孔径分离胶时,受阻滞的程度不同而表现出不同的迁移率 ,这就是分子筛效应。
电荷效应:
蛋白质样品在界面处被浓缩成一狭窄的高浓度蛋白质区,但由于每种蛋白质分子所带有效电荷不同,因而泳动率也不同,因此各种蛋白质就按泳动率快慢顺序排列成一个一个区带。在进入分离胶时,电荷效应仍起作用。目前,PAGE连续体系应用也很广,虽然电泳过程中无浓缩效应,但利用分子筛及电荷效应也可使样品得到较好的分离,加之在温和的pH条件下,不致使蛋白质、酶、核酸等活性物质变性失活,也显示了它的***性。这种方式可以有效地使用电场,但在装置设计上有一些困难,如液体泄漏,用电安全和操作麻烦等问题。
蛋白电泳制胶
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制胶
将玻璃板洗净晾干,将厚板粘有边条的一侧与薄板重叠(薄板向外),放入制胶框内(如果放置困难可选择先放厚板再放薄板要求2块玻璃板底面对齐),将制胶夹胶框的卡锁转向外侧,将玻璃板固定。
用手捏紧制胶架上的固定夹,将整个制胶框置于制胶架上,松开固定夹,令卡块压住厚玻璃板,使玻璃板底面贴紧制胶架底部的密封垫。
向凝胶腔内缓慢注入配制好的聚***酰胺凝胶(如灌制梯度凝胶需使用梯度混合器),先灌注分离胶,待分离胶凝固后,再灌浓缩胶。 浓缩胶灌满后,插入样品梳,待30至45分钟凝胶完全聚合后,制胶完成。
蛋白电泳槽的凝胶置入与电泳
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a,将控制夹板呈打开方式放置于干净平整桌面上
b,将首块凝胶三明治以薄玻璃板向内方式放置于凝胶支撑架上,凝胶支撑架模铸于组件底部且每侧均有两个,此时凝胶板相对中心有30 度夹角,放置首块胶时须小心确认控制夹板保持平衡状态不会翻倒,在另一侧凝胶支撑架上放置第二块胶,共有两块胶相对中心倾斜(注:凝胶板必须以薄玻璃板向内方式放置于控制夹板两侧,同时,控制夹板需要 2 块胶板组合形成功能组件,如果运行1 或 3 块胶时,须使用单胶堵板代替另一侧的凝胶)。不连续系统电泳体系中由于缓冲液离子成分、pH、凝胶浓度及电位梯度的不连续性,带电颗粒在电场中泳动不仅有电荷效应、分子筛效应,还具有浓缩效应,故分离效果更好。
c,用一只手轻轻将2块胶板推向中心靠紧绿色胶条,确保短玻璃板处在绿色胶条上部的凸起之下并压紧胶板,另一只手将控制夹板合拢在胶板上,使其锁定到位。
d,电泳槽下槽具有两个位置可放置两个电泳槽内芯:带插头电泳槽内芯在后,蘑菇头电泳槽内芯在前,如果只运行 2 块胶则只需用带插头电泳槽内芯,将其放在后部位置上使得红色正极与槽右侧的红色标记相对应,如需做 4 块胶,除放入带插头电泳槽内芯外,还要将蘑菇头电泳槽内芯放入前部位置,确认两者的红色正极与槽右侧的红色标记相对应(注意:位置和方向的错误会使上盖无法盖合)。LF-Mini3型小型垂直电泳槽技术参数:外型尺寸(L×W×H):180×130×160mm凝胶板规格(L×W):83×73mm样品梳:10/15齿,1。
e,将上盖盖在电泳槽下槽上,确认插头位置正确(上盖上的障碍物可以防止定位错误)。
f,将电泳槽导线的双插头认准正负极插入电泳电源插孔内,恒压 200V 是 SDS-PAGE 和多数 native PAGE 电泳的推荐条件。在 200V 电压条件下运行,SDS-PAGE 大约需要 35 分钟。
g,电泳完成后关断电源,拔出电源插头,移开上盖,小心取出电泳槽内芯,倒出缓冲液。为防止缓冲液漏洒,请在打开控制夹板前倒掉缓冲液。
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